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黃酮類化合物屬于植物的次生代謝產(chǎn)物,在植物界分布很廣,大多數(shù)情況下和糖苷鍵結(jié)合成苷類或碳糖基,有的還以游離形式存在。黃酮的藥用作用實在太多了,比如預防心腦血管疾病等。黃酮類化合物在植物體內(nèi)的形成,是由葡萄糖經(jīng)過莽草酸途徑和乙酸-丙二酸途徑,生成羥基桂皮酸和三個分子的乙酸,然后合成查爾酮,再衍生出各類的黃酮類化合物。
測定槐花中的總黃酮含量,其基本原理是:利用溶液中的鋁離子和總黃酮中的羥基或甲氧基發(fā)生絡合作用,在強酸的條件下形成穩(wěn)定的有色絡合物。最后,利用紫外可見分光光度計測定產(chǎn)物的吸光度,并使用標準曲線計算出槐花中的總黃酮含量。
標準曲線的測定,分別稱取對照品1,2,3,4,5,6mL,各自放在25mL容量瓶中,加水到6.0mL,加亞硝酸鹽溶液,混勻后加入硝酸鋁溶液,再加入氫氧化鈉溶液,最后加水定容到刻度。以空白試劑為對照,在分光光度計500nm波長下測定吸光度。以測定的吸光度值為縱坐標,以對照品對應濃度為橫坐標,繪制成標準曲線,并計算出回歸方程。
對樣品進行處理,將槐花粉碎,加入甲醇,超聲30min后過濾,精密吸取10mL,加水定容至100mL的容量瓶中備用。檢測的方法,和標準品測定吸光度的步驟相似,根據(jù)測定的吸光度值,結(jié)合標準曲線,計算出樣品中的總黃酮含量。
注意事項:樣品精確稱量,避免出現(xiàn)誤差。在強酸的條件下進行反應,要注意安全,避免出現(xiàn)腐蝕。