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一般的氨基酸包括氨基和羧基，氨基酸中含有氨基的氫和分子中其他部分發(fā)生替代而形成亞肽的環(huán)狀化合物。游離氨基酸，就是沒有形成肽的氨基酸。氨基和羧基結(jié)合在同一個(gè)碳原子上，稱為α-氨基酸，天然的游離氨基酸大多數(shù)情況下是這樣的。在生物體內(nèi)，游離氨基酸能夠促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，能量供給，促進(jìn)肌肉生長(zhǎng)，調(diào)節(jié)酶活。在植物生長(zhǎng)代謝的過程中，游離氨基酸含量的變化和植物組織生理特征是有一定的關(guān)系的。因此，測(cè)定植物中游離氨基酸的含量，對(duì)于研究植物的生理特征以及提取應(yīng)用都有比較大的幫助作用。

常用的檢測(cè)游離氨基酸的方法是茚三酮法，其測(cè)定原理是：在酸性條件下，氨基酸和茚三酮溶液共熱，生成氨。氨和茚三酮發(fā)生反應(yīng)生成紫色的化合物“二酮茚胺”。這個(gè)化合物在波長(zhǎng)為570nm的分光光度計(jì)上可以測(cè)定吸收值，在一定范圍內(nèi)這個(gè)化合物顏色的深淺和氨基酸的含量是成正比的。因此，可以通過這個(gè)原理來(lái)測(cè)定樣品中游離氨基酸的含量。

實(shí)驗(yàn)過程

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

分別取0.3mol/L的標(biāo)準(zhǔn)氨基酸溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL到試管中，用蒸餾水補(bǔ)足1mL。再各加入1mL的醋酸緩沖液，接著加入1mL的茚三酮顯色液。將以上的試劑充分混勻后，在沸水浴中加熱15min，冷卻放置5min，加入3mL乙醇溶液稀釋，充分搖勻。在分光光度計(jì)570mm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，以吸光度值為縱坐標(biāo)，以氨基酸的濃度為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出線性回歸方程。可以重復(fù)三次，求取平均值。

2.提取

精準(zhǔn)的稱取1.0g的植物組織，放在研缽里面搗碎，加入5.0mL的乙醇溶液，研磨均勻成漿，轉(zhuǎn)移到100mL的容量瓶中，用蒸餾水稀釋，定容到刻度，并過濾掉三角瓶中備用。

3.測(cè)定

取樣品溶液1.0mL，加入pH5.4，2mol/L的醋酸緩沖液1mL，和茚三酮顯色液1mL，混勻后在沸水浴中加熱15min，冷卻放置5min，加入3mL60%的乙醇溶液稀釋，混勻后在570nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。根據(jù)測(cè)定的吸光度值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以計(jì)算出樣品中所含有的游離氨基酸的含量。