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鐵皮石斛多糖含量檢測
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-06-19 | 216 次瀏覽 | 分享到:

鐵皮石斛具有悠久的歷史,是一味很好的中草藥。石斛里面有很多有效成分,比如生物堿、多糖、氨基酸、酚類等。每一類物質(zhì)成分都有對應(yīng)的功能,也是靠通力配合才能共同完成對應(yīng)的作用機制,比如酚類能抗衰老,多糖能增強免疫力等。石斛多糖具有清除自由基,提高抗氧化酶活性,抑制脂質(zhì)過氧化,保護生物膜等,具有較強的抗氧化能力。《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載,具有“輕身延年”的作用。



檢測鐵皮石斛的方法有很多種,包括酚硫酸法,硫酸蒽酮法等。這些方法有一個共同的特點,就是利用石斛中的多糖和特定試劑發(fā)生反應(yīng),通過顯色物產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和多糖的濃度是成線性的關(guān)系的,于是乎,就用分光光度計測定標準品的吸光度。吸光度值是可以讀取數(shù)據(jù)的,濃度是已知的,通過幾個點的測定就可以制作出標準曲線了。這個曲線就像標準線譜一樣,依靠它,通過樣品的吸光度值,才能得到對應(yīng)的、理論上的樣品多糖濃度。


1.酚硫酸法


這是一種常見的檢測多糖含量的方法,當溶液中有酚存在的時候,多糖能夠在濃硫酸的作用下產(chǎn)生藍色或紫色的反應(yīng)產(chǎn)物。準備一個研缽,將鐵皮石斛研碎,并稱取備用。用0.1,0.2,0.4,0.6,0.8g/L的多糖標準溶液,分別用酚和濃硫酸進行處理。分別測定對應(yīng)濃度下的吸光度值,制作成標準曲線。將樣品也加入酚和濃硫酸,保持一段有效的反應(yīng)時間,并測定它的吸光度值,可以多測幾次求取平均值。根據(jù)標準曲線,計算出樣品中的多糖含量。



2.硫酸蒽酮比色法


石斛多糖在濃硫酸的作用下,會被水解成單糖分子,并迅速的脫水形成糠醛??啡┚陀幸馑剂?,它能夠和蒽酮試劑發(fā)生縮合反應(yīng),產(chǎn)生糠醛衍生物。這個糠醛衍生物是有顏色的,正常情況下是呈藍綠色的,而且能夠在一定時間內(nèi)穩(wěn)定的?,F(xiàn)在做檢測,如果溶液的顏色不穩(wěn)定,很容易測不準的。顏色越穩(wěn)定,濃度就越均勻。如果顏色很快就變了,那測得的吸光度就和濃度之間的關(guān)系發(fā)生變化了。這個變化暫且說是怎么樣的,但和理想的狀態(tài)下是有一點差別的。但是,這個差別是有很難發(fā)現(xiàn)的。


因此,在使用比色法檢測多糖濃度的時候,需要注意顏色的變化時間。有的是試劑盒的形式,說明書上會標出來注意事項,在多少分鐘內(nèi)完成測定吸光度值。采用分光光度計,在624nm波長處測定吸光度值。同樣,采用0.1,0.2,0.4,0.6,0.8g/L的多糖標準溶液,測定對應(yīng)吸光度值,并繪制標準曲線。對樣品也進行同樣的操作,并測定吸光度值。根據(jù)標準曲線,是可以計算出樣品中多糖的濃度的。


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