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酪氨酸是一種含有酚羥基的芳香族極性α-氨基酸,它是人體必需的氨基酸。酪氨酸是用作生產(chǎn)食品、飼料、化工、原料藥等。在食物中含量尤為豐富,比如西紅柿、動物肝臟、魚類、香蕉、菠蘿、柑橘等。酪氨酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸,它具有電離的芳香環(huán)側(cè)鏈,在人和動物體內(nèi)由苯丙氨酸羥化而形成的,對新陳代謝、生長發(fā)育具有重要的作用。有多重要?這么說吧,它常作為苯丙酮患者的營養(yǎng)補充劑。
檢測植物中的酪氨酸含量,可以用HPLC或LC-MS,也可以用紫外分光光度法。在科研領(lǐng)域,根據(jù)對酪氨酸的研究程度,選擇對應(yīng)的檢測方法。檢測不是目的,是為了獲取更準確的結(jié)果,從而為對微觀領(lǐng)域的探索做出指導(dǎo)。根據(jù)對植物中的酪氨酸的含量、結(jié)構(gòu)等方面檢測,進一步判斷是什么部位或結(jié)構(gòu)與眾不同,在代謝機制中發(fā)揮著不可替代的作用。通常情況下,我們了解的植物有很多種,不只是為了知道有多少含量,為發(fā)揮機制,甚至科研做進一步的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。因此,檢測數(shù)據(jù)對結(jié)果有比較大的影響。而檢測數(shù)據(jù)是靠過程中的操作和方法來決定的,考察操作的基本功,更是對方法的探索。
先用紫外分光光度計檢測標(biāo)準酪氨酸溶液,使用不同的檢測波長測定,找到最大的吸收值對應(yīng)的波長,將這個波長固定為檢測酪氨酸的波長。取5只比色管,將標(biāo)準的酪氨酸配制成5個梯度濃度的標(biāo)準溶液,測定系列標(biāo)準溶液的吸光度值。以濃度為橫坐標(biāo),以吸光度值為縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準曲線來。對樣品進行處理,并在標(biāo)準溶液檢測同樣的條件下測定其吸光度值,可以重復(fù)幾次,求取平均值。用測定的吸光度值,結(jié)合標(biāo)準曲線,可以計算出樣品中所含有的酪氨酸濃度。這是一種參照的方法,和所有光譜一樣,都要依據(jù)一定的線性關(guān)系,才能準確獲得某個吸光度值對應(yīng)的濃度。
對于酪氨酸的檢測,如果需要用LC-MS測定,那是想對精準的了。首先,LC-MS檢測的靈敏度高,通過LC將樣品中的雜質(zhì)盡可能的去除,獲得想對干凈的、有效的酪氨酸。但這還不夠,要通過質(zhì)譜檢測器,以電荷比的形式來確定分子量,定量測定酪氨酸的含量。這種方法需要有專業(yè)的技術(shù)人員,不僅熟悉設(shè)備的操作,對方法也要有足夠的了解,可以做方法驗證,也能夠調(diào)試設(shè)備,處理數(shù)據(jù)和報告。一般科研方面,可以有專業(yè)的機構(gòu)來完成。