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麥角甾醇含量測定方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-07-04 | 732 次瀏覽 | 分享到:

麥角甾醇是什么呢?其實,它還有一個名字叫麥角固醇。這是通過微生物發(fā)酵合成而來的,不僅具有獨特的生理作用,比如抗菌、抗炎、抗氧化等,還被廣泛的用在藥物開發(fā)領(lǐng)域。麥角甾醇是真菌細胞膜的重要組成部分,結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,專一性強。怎么說呢?如果要測真菌的生物量,可以通過測麥角甾醇的含量來代表了。那么,麥角甾醇在細胞中起到什么作用呢?它能夠確保細胞富有活力,保持膜結(jié)合蛋白的活性,細胞物質(zhì)代謝的過程中可以起到運輸大隊長的作用。



檢測樣本中麥角甾醇的含量,常用的方法有氣相色譜(GC)法、紫外分光光度法、高效液相色譜(HPLC)法等。HPLC是檢測麥角甾醇的常用方法,不同的樣品采用的方法也是一點差別的。液相檢測的方法,其實就是確定檢測過程的條件,最終得到科學準確的、有理有據(jù)的數(shù)據(jù),分析出結(jié)果令人可信。



工欲善其事,必先利其器,設(shè)備和試劑的準備是不可缺少的。其中,要測定的指標一定需要有對照品,也就是參考標準。比如,精密稱量麥角甾醇對照品2.5mg,放置于5mL的容量瓶中,加入甲醇溶解并定容,制備成0.5mg/mL的標準溶液。對樣品的處理,也是非常關(guān)鍵的。它是基礎(chǔ)性的,考驗的是實驗的基本功。如果樣品提取沒有準確,測定過程有多精密,結(jié)果也未必真實。精確稱量5g植物樣品,加入石油醚,在60℃-90℃條件下索氏提取6h,提取液水浴蒸干,甲醇溶解,定容到5mL容量瓶中,就是樣品溶液了。


檢測數(shù)據(jù)怎么樣,就要看實驗條件了。HPLC檢測采用常規(guī)的C18色譜柱,250mmx4.6mm,5um;流動相為甲醇,柱溫25℃,檢測波長283nm,流速1.0ml/min,進樣量為10uL。上機檢測,測定標準品和樣品的色譜峰。對標準品進行梯度濃度進樣,對檢測出來的色譜峰進行數(shù)據(jù)分析,繪制標準曲線,求得回歸方程。如果是新的方法,需要考察精密度、重復性、回收率等。最終,計算出樣品中的麥角甾醇含量。


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