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青貯有機酸是將新鮮的植物收集起來并壓實,和外界隔絕空氣,在微生物如大腸桿菌、霉菌、酵母菌等作用下,進行厭氧發(fā)酵,產生了一系列的有機酸。青貯材料有玉米,高粱,草類,豆類等,所產生的有機酸包括甲酸,乙酸,丙酸,丁酸,乳酸,山梨酸,苯甲酸等。青貯有機酸能夠降低環(huán)境的pH值,在一定程度上抑制了微生物的生長和繁殖。青貯一般是用做飼料的,通過檢測青貯飼料中的有機酸含量,可以及時了解飼料的發(fā)酵程度和質量狀況。有機酸含量過高或過低都可能影響飼料的營養(yǎng)價值和保存期限。
實驗室檢測青貯有機酸的含量,根據具體有機酸來確定方法。常用到的有高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法等。以HPLC為例,用乳酸,乙酸,丙酸,丁酸為標準品,測定青貯中的有機酸含量。
前處理:稱取青貯樣品20g,放到一個容器中,加入180mL的水,用組織搗碎機勻漿1min。用4層的紗布粗過濾,在用濾紙過濾,浸提液用0.45um微孔濾膜過濾待測。
色譜條件:C18色譜柱,250mm長,4.6mm內徑,5um粒徑,柱溫20-25℃;以磷酸二氫鉀(用磷酸調pH值)和甲醇為流動相,梯度洗脫,流速為1ml/min,紫外檢測器,波長為215nm,進樣量10-20uL。也有用離子交換色譜柱,55℃,2.5mmol/L的硫酸溶液的流動相,流速0.6ml/min,紫外檢測器,210nm,進樣量10uL。
標準曲線:將4種標準品,進行溶解,梯度稀釋6個濃度點,保持在檢測器的有效檢測范圍內。按色譜條件,進樣到HPLC,在軟件中記錄各個色譜峰。以色譜峰面積為縱坐標,對應有機酸的各個濃度點為橫坐標,繪制出標準曲線,得到回歸方程。r2>0.999,確保測試數據的有效性。在很多的文獻中,需要對色譜條件進驗證和優(yōu)化,測定實驗的重復性,精密度,加標回收率等。
樣品測定:將樣品注入到HPLC中,對應的色譜峰的出峰時間是一致的,得到相應的峰面積。根據標準曲線的回歸方程,計算出樣品中的各種有機酸的含量。