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石斛堿主要來源于中藥材鐵皮石斛等的莖部，是一種吡咯里西啶衍生物。它是含氮的有機化合物，化學(xué)式為C16H25NO2，分子量為263.27，易溶于乙醚、氯仿，難溶于乙醇、水。它具有多種藥理作用，比如止痛和解熱，降低心律和血壓，促進(jìn)消化和調(diào)節(jié)免疫力等。它的生物活性與木防己毒素相似，根據(jù)分子結(jié)構(gòu)來判斷屬于倍半萜類生物堿，可應(yīng)用于藥物代謝研究等領(lǐng)域。

檢測樣品中的石斛堿含量，實驗室常用的方法有高效液相色譜（HPLC），氣相色譜（GC），液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）等。

以HPLC為例

1.樣品處理

獲取中藥材鐵皮石斛或其他種類的植物樣品，進(jìn)行粉碎過篩，精密稱量5g，置于25ml的容量瓶中，加入20ml的甲醇，超聲提取30min。取出，在室溫下冷卻，用甲醇定容。用0.22um的微孔濾膜過濾，待測。

2.色譜條件

C18的色譜柱，長250mm，內(nèi)徑4.6um，粒徑5um。柱溫30℃。甲醇和磷酸二氫鉀（KH2PO4）（65:35）為流動相，等度洗脫，流速1ml/min。紫外檢測器，波長260nm，進(jìn)樣量10-20uL。根據(jù)實際環(huán)境條件和設(shè)備參數(shù)，進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。比如有用水+乙腈為流動相，梯度洗脫，盡可能的將樣品中的石斛堿洗脫出來，并在檢測器中顯示完整有效的色譜峰。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱取石斛堿的標(biāo)準(zhǔn)品，放在10ml的容量瓶中，用甲醇進(jìn)行溶解，梯度的稀釋成5-7個濃度點作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄濃度值。在有效的色譜條件下，注射到HPLC中，或手動或自動，在軟件中記錄色譜峰的保留時間和位置。觀察色譜圖的出峰情況，將幾個色譜峰面積進(jìn)行積分處理，對應(yīng)到每個峰的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，在表格中可以繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線?？梢钥吹较嚓P(guān)系數(shù)r2一般是大于0.999，確保測定數(shù)據(jù)在良好的線性范圍內(nèi)。

4.樣品測定和計算

將樣品注入HPLC中，和標(biāo)準(zhǔn)品相同的色譜條件下，測定并記錄色譜峰和數(shù)據(jù)。對目標(biāo)色譜峰進(jìn)行識別，并對峰面積進(jìn)行積分，代入到回歸方程，計算出樣品的石斛堿含量?？疾炀芏?，樣品穩(wěn)定性，回收率，方法重復(fù)性。