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丁酸含量檢測方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-07-18 | 586 次瀏覽 | 分享到:

丁酸是直鏈飽和脂肪酸,也是短鏈脂肪酸,化學式為CH3(CH2)2COOH,分子量:88.11,能夠溶于水、乙醇和乙醚等。天然的丁酸存在與香茅、肉豆蔻、奶油等中,可以做食用香料、水果香精,也可以作為萃取劑,用于制備丁酸脂類化合物。丁酸可以發(fā)生脫水、酯化、α-H、脫羧等反應。在動物脂肪和植物油中以丁酸酯形式存在,在工業(yè)上用蔗糖或淀粉發(fā)酵的形式來獲取丁酸。



檢測樣本中的丁酸含量,方法還是比較多的。通常情況下,采用的是高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法、液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法、氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)法、比色法等。方法雖多,但道理是一樣的。這里我們簡單的介紹一下,根據(jù)需求來選擇對應的方法。


1.高效液相色譜(HPLC)法


從樣本溶液中將丁酸分離出來,這主要靠色譜柱和流動相。選擇適當?shù)纳V柱,可以讓混合物中的丁酸和其他物質(zhì)分離開來,這里用一般的C18色譜柱。流動相的話,就是將色譜柱上的丁酸,沖洗出來并進入檢測器獲取對應的信號,從而轉(zhuǎn)化成有效的圖譜和數(shù)據(jù)。因此,流動相就要盡可能的將丁酸洗脫出來,這里用的是甲醇-水混合溶劑。在色譜條件設置的時候,還有很多其他因素和參數(shù)影響到檢測結(jié)果,比如柱溫、進樣量、流速、檢測器等。



選擇最佳的色譜條件,其實并不是容易得事情。如果有現(xiàn)成的方法或標準,那就直接操作就行了。如果要對方法開發(fā),那就要最優(yōu)化設計,從而確保能夠最大程度上檢測出結(jié)果。說來話長了,這里先說檢測步驟吧。樣品的準備是不可忽略的,如果樣品處理不恰當,結(jié)果會出現(xiàn)較大的偏差的。因此,這個前期處理是需要認真核對,去除雜質(zhì),粉碎成末,并加入適當?shù)娜軇┹腿 =又L制標準曲線,對標準品實現(xiàn)梯度稀釋,并進樣到色譜系統(tǒng),測定它們的峰面積并繪制標準曲線。接著,將待測樣品注入到液相色譜,測定色譜峰高和峰面積,根據(jù)標準曲線計算出樣品中丁酸含量。需要測重復性,穩(wěn)定性,回收率等。也可以先測樣品,再測標準品,避免出現(xiàn)色譜柱被標準品污染的情況。


2.氣相色譜(GC)法


氣相色譜是利用惰性氣體為流動相,以色譜柱來分離混合物中的丁酸,通過檢測器來獲取信號并讀取數(shù)據(jù)。就是通過加熱的方法,將溫度升高到丁酸的沸點左右,跟著氣體一起進入到檢測器。樣本的準備,和HPLC是相似的。色譜柱和條件的選擇是不同的,色譜柱是用毛細管色譜柱,以氮氣為載氣,流速為1.0mL/min。準備不同濃度的丁酸標準溶液,并進樣檢測,根據(jù)色譜檢測數(shù)據(jù)繪制標準曲線。對樣品進行檢測,記錄色譜圖和數(shù)據(jù),并根據(jù)標準曲線,計算樣品中含有的丁酸含量。



此外,還有LC-MS和GC-MS檢測法,這兩種方法搭載了高靈敏度的質(zhì)譜檢測器,更深入、更準確對丁酸進行定性和定量分析。不過,檢測精度越高,成本也相應增加了。隨著科技的發(fā)展,也可以采用試劑盒的方法測定。


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