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硫苷含量檢測方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2025-03-24 | 42 次瀏覽 | 分享到:
硫苷的全稱是硫代葡萄糖苷,它是十字科蔬菜中的一種次生代謝產(chǎn)物。根據(jù)側(cè)鏈基團的不同,可以分為脂肪酸,芳香族,吲哚族。硫苷的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)種類比較多,有直碳鏈,支碳鏈,羥基,羰基等。硫苷的側(cè)鏈R基團是不同的,當R基團為甲硫氨酸,丙氨酸,纈氨酸,亮氨酸和異亮氨酸的時候,它就是脂肪族硫苷;當R基團是苯丙氨酸和酪氨酸,為芳香族硫苷;當R基團為色氨酸時,為吲哚族硫苷。硫苷降解產(chǎn)物具有一定氣味,具有殺菌殺蟲的作用。

硫苷的全稱是硫代葡萄糖苷,它是十字科蔬菜中的一種次生代謝產(chǎn)物。根據(jù)側(cè)鏈基團的不同,可以分為脂肪酸,芳香族,吲哚族。硫苷的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)種類比較多,有直碳鏈,支碳鏈,羥基,羰基等。硫苷的側(cè)鏈R基團是不同的,當R基團為甲硫氨酸,丙氨酸,纈氨酸,亮氨酸和異亮氨酸的時候,它就是脂肪族硫苷;當R基團是苯丙氨酸和酪氨酸,為芳香族硫苷;當R基團為色氨酸時,為吲哚族硫苷。硫苷降解產(chǎn)物具有一定氣味,具有殺菌殺蟲的作用。


檢測方法,有高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法、質(zhì)譜(MS)法、分光光度法等。


以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測過程和注意事項。


1.樣品前處理


能不能測定出來樣品中的硫苷,前處理是非常重要的。特別要考慮硫苷的物理和化學(xué)性質(zhì),參考過去的文獻資料,有效的經(jīng)驗,可以獲得相對準確可靠的方法。當然,并不是所有的經(jīng)驗都是有效的,就實際情況來判斷和處理。處理樣品的方法,是大同小異的。相同的是有粉碎,過篩,對應(yīng)的有機溶劑,水浴,振蕩,超聲,離心,過濾,提取等。不同的是每個步驟的用量,濃度,時間,溫度等都需要相對準確的參數(shù),這樣才能盡可能將目標化合物分離出來。進入溶液中,從而有利于后續(xù)的hplc測定含量。這一步是非常基礎(chǔ)的,但也是很關(guān)鍵的。如果做不好,很可能會有很少或檢測不出來,從而導(dǎo)致不準確的判斷。



2.HPLC色譜條件


要對HPLC的結(jié)構(gòu)和參數(shù)都非常的熟悉,比如,測什么化合物,就知道一定會用哪種色譜柱,什么流動相和檢測器。如果是做方法開發(fā),就要做條件優(yōu)化設(shè)計,參照不同濃度和參數(shù),得到最優(yōu)化的參數(shù)組合。一般對于過去用過的,做一下方法驗證或稍微優(yōu)化點參數(shù);如果是完全不熟悉的,就要重新設(shè)計,找到比較適合的色譜柱,流動相,檢測器波長等。比如,采用C18的色譜柱,260mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑;以水和乙腈為流動相,梯度洗脫,1ml/min;紫外檢測器,229nm;進樣量10-20uL。



3.標準曲線


使用標準品,溶解定容后,進行梯度稀釋5-7個點,一般選擇6個濃度點。梯度稀釋,并不是隨意的稀釋,而是要考慮到檢測限。比如,檢測器信噪比的5-10倍為最低點,這樣就可以預(yù)先知道該怎么稀釋。通過6個不同的濃度,進樣到HPLC,測定出來各自的色譜峰。對峰面積進行積分處理,結(jié)合對應(yīng)的濃度,用表格函數(shù),可以得到標準曲線,回歸方程,相關(guān)系數(shù)r2需要大于0.999。有的地方,要考慮到回收率,重復(fù)性,精密度等。


4.樣品的測定


對樣品的測定,有的時候比較順利,有的時候要考慮流動相或色譜柱污染等問題。通過測定出來的色譜峰面積,代入到回歸方程,就能計算出樣品中的硫苷含量。


分光光度法可以參考GB/T 23890-2009《油菜籽中芥酸及硫苷的測定 分光光度法》


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