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阿魏酸是一種有機(jī)物,它是從植物中提取出來(lái)的。其中,在阿魏、當(dāng)歸、川芎、升麻、酸棗仁等中藥材種含量比較高。因此,現(xiàn)在就考慮從川芎中提取并檢測(cè)其含量。阿魏酸具有很強(qiáng)的抗氧化活性,抗輻射能力。就檢測(cè)方法來(lái)說(shuō),這里說(shuō)的是高效液相色譜(HPLC)法。檢測(cè)植物體內(nèi)的有機(jī)物含量,HPLC法是常用的。
檢測(cè)原理:通過(guò)對(duì)樣品進(jìn)行處理,比如水浴蒸干,加甲醇熱回流,過(guò)濾,殘?jiān)铀芙?,稀鹽酸調(diào)pH=1-2,煮沸,用乙醚提取,殘?jiān)眉状既芙?,過(guò)濾。將獲得的提取液,進(jìn)入HPLC內(nèi)進(jìn)行色譜分離(C18色譜柱,流動(dòng)相甲醇:1%乙酸水= 28:72),用紫外檢測(cè)器獲取信號(hào)值,在波長(zhǎng)323nm的地方就可以測(cè)定阿魏酸的吸收值。根據(jù)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出樣品中的阿魏酸含量。
標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè):先對(duì)阿魏酸的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋,精確稱量30mg阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品,放在50ml的容量瓶中,加入甲醇溶解并定容至刻度,混勻。然后,精密吸取5mL置于50ml的容量瓶中,加入甲醇至刻度,混勻,得到對(duì)照品的溶液使用。精密吸取這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品溶液2、8、12、16、20μL注入高效液相色譜儀,用紫外吸收檢測(cè)器,于波長(zhǎng)323nm處測(cè)定阿魏酸的峰高和峰面積值,以進(jìn)樣量對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行線性回歸,得到回歸方程。
樣品檢測(cè):用移液器吸取10ul的樣品溶液,注入到HPLC內(nèi),還是用波長(zhǎng)為323nm的紫外檢測(cè)器,測(cè)定阿魏酸的峰值和峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出阿魏酸的含量。
注意事項(xiàng):評(píng)估方法,做精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn)。