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植物組織體內(nèi)的維生素C能夠增強植物的抵抗力,防止有害物質(zhì)的入侵,提高防病能力。具有抗氧化的作用,防止植物過早的進入早衰狀態(tài)。它還能夠保護細胞,防止毒素或自由基對細胞的傷害,確保新陳代謝的正常進行。維生素C可以作為一種藥物,用于促進植物的生長,減少病蟲害,達到優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的目的。
檢測植物組織體內(nèi)的維生素C含量的方法有碘量法、2,6-二氯靛酚法、N-溴琥珀酰亞胺(NBS)滴定法、比色法、紫外分光光度法、高效液相色譜法。
1.碘量法
這種方法就是利用維生素C在酸性溶液中,以淀粉為指示劑,用碘滴定的方法來確定含量的。用碘滴定液去滴定樣品溶液,當溶液出現(xiàn)藍色的時候,而且30s內(nèi)不會褪色,就是滴定終點了。在滴定的過程中,因為維生素C和氧氣接觸的時候會發(fā)生氧化反應,導致維生素C含量降低。因此,在配置溶液的時候,要采用新煮沸過的冷水來溶解,從而減少水中溶解氧對維生素C的影響。
2.2,6-二氯靛酚法
2,6-二氯靛酚是一種氧化還原型的指示劑,利用維生素C的強還原性,可以讓氧化性的紅色溶液還原為無色的溶液。通過這種顯著的顏色變化,可以測定溶液中的維生素C含量。維生素C在酸性溶液中用2,6-二氯靛酚滴定時,滴定至溶液顯玫瑰紅色時,即為終點,無需另加指示劑。在植物體內(nèi),具有還原性的物質(zhì)不只有維生素C,還有其他的還原性的化合物也能夠參與反應,這樣就會造成誤差。通過研究表明,維生素C氧化的速度要比其他化合物反應的快,可以避免干擾物質(zhì)的影響,藥典中規(guī)定應在2min內(nèi)完成滴定。
3.N-溴琥珀酰亞胺(NBS)滴定法
N-溴琥珀酰亞胺具弱氧化性,而維生素C為強還原劑,當有其他還原劑干擾時,N-溴琥珀酰亞胺有選擇性,首先按定量氧化維生素C。滴定的時候,采用碘化鉀和淀粉作為指示劑,當溶液中的維生素C被氧化結(jié)束的時候,稍微一點點的NBS就能夠氧化碘化鉀,和淀粉指示劑顯示藍色。
4.紫外分光光度法
維生素C在酸性的溶液中是比較穩(wěn)定的,但遇到了空氣中的氧、熱、光、堿性物質(zhì),以及銅鐵等金屬離子,就會促進它的氧化速度。它具有π電子的共軛雙鍵化合物、芳香烴化合物等,在紫外光譜下具有強烈的吸收性。維生素C在ph5-6之間是相對穩(wěn)定的,在波長267nm(僅供參考)處具有最大吸收,可以通過維生素C催化氧化前后的變化,測定溶液中維生素C的含量。
5.高效液相色譜法
以C18和反向柱為固定相,乙腈0.05mol/L醋酸鈉溶液為流動相,在216nm的波長下根據(jù)保留時間和峰面積進行定量檢測維生素C。