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細胞內(nèi)氨基酸檢測方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-05-14 | 188 次瀏覽 | 分享到:

氨基酸分為蛋白類氨基酸和非蛋白類氨基酸。其中,蛋白類氨基酸參與蛋白分子合成,根據(jù)氨基在碳鏈上的位置不同,可以分為α、β、γ等氨基酸。構(gòu)成天然蛋白質(zhì)的氨基酸都是α型的,包括20種常見的氨基酸和2種不常見氨基酸。非蛋白類氨基酸就不能構(gòu)成蛋白,它需要經(jīng)過修飾才能參與蛋白的合成,比如瓜氨酸。目前,檢測氨基酸的方法有分光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜法、紅外檢測、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、毛細管電泳法等。



常見的氨基酸對可見光是沒有吸收能力的,在紫外光下有比較小的吸收。但是,絡(luò)氨酸、色氨酸和苯丙氨酸這3種氨基酸卻有很強的吸收能力。因為大多數(shù)的蛋白質(zhì)都含有這3種氨基酸,尤其是絡(luò)氨酸相對普遍。因此在測定蛋白含量的時候,就以絡(luò)氨酸吸收的特征來測定。絡(luò)氨酸在280nm的波長下,蛋白質(zhì)溶液吸光值和濃度成正比。除了蛋白質(zhì)的檢測,也可以單獨對每種氨基酸進行測定。



高效液相色譜(HPLC)是檢測氨基酸的常用方法,以流動相和色譜柱為分離,檢測靈敏度高。由于大多數(shù)的氨基酸沒有紫外或熒光反應(yīng)。因此,需要對樣品進行衍生化處理,將它們轉(zhuǎn)變?yōu)槟軌蛲ㄟ^紫外吸收或發(fā)射熒光的物質(zhì),再進行上機檢測,可以有效的分離和檢測出各種氨基酸及其代謝物。



分光光度法,剛剛已經(jīng)說了,氨基酸本身是沒有辦法通過紫外吸收檢測出來的。利用氨基酸和衍生劑發(fā)生化學反應(yīng),產(chǎn)物藍紫色的化合物。這個化合物在某個波長處能夠顯示最大的吸收峰,根據(jù)吸收值和濃度的關(guān)系,測定其含量。其中常用的衍生劑是茚三酮,使用分光光度法測定氨基酸是相對比較簡單的,成本低,應(yīng)用范圍廣,甚至可以測芳香族氨基酸。


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