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神經(jīng)遞質(zhì)是指神經(jīng)元和細(xì)胞之間傳遞信息的化學(xué)物質(zhì),常見的有膽堿類、單胺類、氨基酸和神經(jīng)肽類等。常用的檢測方法是高效液相色譜(HPLC)法、液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法。
LC-MS檢測神經(jīng)遞質(zhì)的含量,是基于神經(jīng)遞質(zhì)在生物樣品中的化學(xué)性質(zhì)和分子量進(jìn)行檢測的??梢詼y定具體神經(jīng)遞質(zhì)的分子量、結(jié)構(gòu)信息和含量。HPLC檢測神經(jīng)遞質(zhì)含量,主要包括樣品準(zhǔn)備、衍生化、色譜分離、檢測器選擇、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作,樣品檢測和計(jì)算結(jié)果。
樣品準(zhǔn)備:收集需要做檢測的生物樣本,通過組織勻漿、蛋白沉淀、固相萃取等步驟純化樣品。
衍生化:有的神經(jīng)遞質(zhì)是不穩(wěn)定的,需要通過衍生化處理,以增加神經(jīng)遞質(zhì)在色譜系統(tǒng)中的穩(wěn)定性,提高靈敏度。
色譜分離:選擇適合的色譜柱和檢測器,比如C18的色譜柱,有機(jī)溶劑和水的流動相,紫外檢測器,質(zhì)譜檢測器等,將處理后的樣品溶液注入到HPLC系統(tǒng),利用色譜柱和流動相的條件將神經(jīng)遞質(zhì)分離出來。
標(biāo)準(zhǔn)曲線:使用液相檢測,就要用到標(biāo)準(zhǔn)品作為參照,識別出樣品中的神經(jīng)遞質(zhì)。并通過梯度體積的上樣檢測,得到對應(yīng)的峰圖譜,根據(jù)峰高和峰面積,對應(yīng)制作出來標(biāo)準(zhǔn)曲線,以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
數(shù)據(jù)計(jì)算:檢測樣品,就是通過色譜圖分析神經(jīng)遞質(zhì)的保留時間和峰面積,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中某種神經(jīng)遞質(zhì)的含量。