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檢測樣品中的山梨酸含量,方法有多種。其中包括高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法、液相質(zhì)譜(LC-MS)法、酶聯(lián)免疫(ELISA)法。
HPLC檢測山梨酸,能實(shí)現(xiàn)對樣品進(jìn)行有效分離,并定量測定出含量,準(zhǔn)確度和靈敏度都比較高。實(shí)驗(yàn)部分采用C18色譜柱,紫外檢測器,甲醇-乙酸銨緩沖液流動相,1.0mL/min的流速,確定最佳的檢測波長。采用山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品,用水稀釋并配制成100ug/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL于10mL的容量瓶中,并用水定容至刻度,配置成5ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、50ug/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,取10ul注入高效液相色譜中,記錄色譜的保留時(shí)間、峰高、峰面積,并繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。對樣品進(jìn)行處理,比如切碎,放入50mL的比色管中,加水到刻度,振蕩搖勻,靜置半個(gè)小時(shí),濾紙過濾。調(diào)節(jié)pH至7,經(jīng)過0.45um過濾膜后,上機(jī)檢測,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的山梨酸含量。
GC法檢測山梨酸,適用于水果、蔬菜等山梨酸的檢測。以氮?dú)鉃檩d氣,5%DEGS+1%H3PO4色譜柱,用氫火焰離子化檢測器檢測。測定山梨酸的峰高,同時(shí)也是要做標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品檢測出來的峰高,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出樣品中山梨酸的含量。
ELISA檢測山梨酸,是利用山梨酸特異性抗體和山梨酸結(jié)合,并通過酶標(biāo)記的二抗,進(jìn)行反應(yīng)的時(shí)候出現(xiàn)顏色的變化。通過這樣的方法,對樣品的山梨酸進(jìn)行定量檢測。這個(gè)方法高效靈敏,適合于飲料等樣品的快速檢測。